基因重组大连蛇岛蝮蛇类凝血酶的制备与性质表征
978-3-639-82684-5
3639826841
168
2019-04-16
35.80 €
chi
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蛇毒类凝血酶属于纤维蛋白原裂解酶,是一种丝氨酸蛋白酶。它们降解纤维蛋白原但不激活凝血因子FactorⅩⅢ,形成的纤维蛋白块能被后继的血液纤溶系统清除。由于它们在血浆中能够降低纤维蛋白原,可以作为抗凝剂使用。从珍稀树栖毒蛇——大连蛇岛蝮蛇(Gloydius shedaoensis)毒液中分离制备的蛇毒类凝血酶制品已经在血栓病临床治疗应用了很多年。可是鉴于国家法律法规禁止捕蛇,天然酶生产面临严峻的挑战,因而基因工程方法是解决这一困境的最佳选择之一。本书内容主要就获得可溶性、活性重组大连蛇岛蝮蛇类凝血酶的制备,尤其是其纤维蛋白原裂解活性开展研究工作。本研究通过在目标蛋白N端融合NusA标签的表达策略,获得了重组蛇岛蝮蛇类凝血酶可溶性、活性表达;人工核酸酶R5可以高效地去除重组大连蛇岛蝮蛇类凝血酶粗样品中的核酸杂质,并对重组酶活力没有损伤,表明人工核酸酶R5在生化工程领域中具有很好的应用潜力;利用四步柱层析纯化获得了高纯度的可溶性重组大连蛇岛蝮蛇类凝血酶,表现出高的酰胺水解活性和纤维蛋白原裂解活性;系统研究了丝氨酸蛋白酶抑制剂、螯合剂、还原剂、凝血酶抑制剂及二价金属离子对重组大连蛇岛蝮蛇类凝血酶活力的影响,结合同源模建手段揭示抑制效应的作用机制。本研究可以为蛇毒类凝血酶的重组制备和临床应用提供依据。
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Bioquímica, biofísica
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