青岛文昌鱼p23基因的克隆、鉴定、表达、纯化和功能分析
978-3-330-82493-5
333082493X
148
2017-05-11
25,80 €
chi
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文昌鱼(Amphioxus)是介于无脊椎动物和脊椎动物之间的过渡类型,是研究脊椎动物进化的珍贵材料。本文从青岛文昌鱼克隆了具有完整编码框的p23基因(AmphiP23),AmphiP23全长1455bp,编码170个氨基酸。在氨基酸水平上与其它动物的p23蛋白的相似性为25.3%-34.7%, 与人的tsp23相似性为21.2%, 且具有典型的p23保守域和共有的保守残基。系统进化分析发现,Amphip23介于脊椎动物和无脊椎动物p23蛋白之间,说明脊椎动物和无脊椎动物p23、tsp23基因是在5.5亿年前由共同的祖先分化而成。Northern blot表明,AmphiP23在文昌鱼成体组织中广泛表达。原位杂交分析表明,AmphiP23在文昌鱼早期神经胚的近轴中胚层、脊索和神经管开始表达,随着神经胚的发育,在体节中胚层和神经管的前部表达,到1天幼虫,AmphiP23在脑泡的背部、后部体节和表皮细胞中表达,而2天幼虫则主要在脑泡表达,说明AmphiP23可能与前后轴形成有关。利用原核表达系统表达并纯化了文昌鱼p23的融合蛋白,获得了分子量大约为22kDa的纯化蛋白,制备了多克隆抗体,Western blot表明,抗体能与文昌鱼p23蛋白特异性杂交。免疫组织化学的结果表明,p23在成体各种组织中分布。同源模建的三维结构表明,其表面保守残基和表面静电势与人p23具有较高的相似性。
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